神經(jīng)生長因子β免疫組化（IHC）試劑盒

Immunohistochemistry detection system kit (Rabbit)

貨號：IHC10806

產(chǎn)品規(guī)格：50ul

產(chǎn)品描述：我公司免疫組化（IHC）試劑盒套裝為免疫組化檢測提供一站式解決方案，方便快捷。可用于檢測以兔單克隆或多克隆抗體為一抗的免疫組化實驗。抗原與一抗形成抗原抗體復(fù)合物，生物素化二抗特異性結(jié)合上述復(fù)合物，經(jīng)辣根酶標(biāo)記的鏈酶卵白素特異性識別生物素，最后經(jīng)辣根酶底物顯色即可檢測相應(yīng)抗原。

保存條件及有效期：一抗試劑0及顯色試劑8,9請-20℃保存，避免反復(fù)凍融，一年有效；其他試劑2-8℃避光封閉保存一年有效，各組分拆封打開后4℃保存一個月有效。

        本試劑盒適用于人、大小鼠等組織，產(chǎn)品規(guī)格及組成：

樣本要求：新鮮活檢樣本組織，中性福爾馬林或多聚甲醛，固定時間 12-48h，參照病理技術(shù)規(guī)范要求取材、脫水、石蠟包埋并制成蠟塊，蠟塊在常溫條件下保存有效期有 5 年。組織切片厚度為 3-5μm 并黏

附在防脫玻片上，輕拍切片架并用吸水紙吸干組織切片中的水滴，再放入 56-60℃恒溫箱中烘烤 2h 后，從恒溫箱中移出玻片放在溫室下冷卻。如果切片在室溫下（15-28℃）保存，為了良好的重現(xiàn)組織中的抗原分

布情況，請于切片制作后 7 天內(nèi)完成檢測。

實驗操作步驟（以石蠟切片為例）

儀器、設(shè)備：

移液槍、免疫組化筆、水浴鍋、計時器、孵育濕盒、切片架、蓋玻片、光學(xué)顯微鏡、洗瓶等。

操作步驟

1. 脫蠟水化。將石蠟切片置于新鮮二甲苯脫中浸泡 15 分鐘，重復(fù)三次。去除多余的液體后，依次置于無水乙醇、95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇、70%乙醇，各浸泡 5 分鐘，蒸餾水（或自來水）沖洗 5 分鐘。用 PBS 緩沖液（試劑 1，將干粉溶解于 1L 去離子水中）沖洗切片 5 分鐘，重復(fù)三次。

2. 抗原修復(fù)。將脫蠟水化后的組織切片置于燒杯（或修復(fù)盒）中的耐高溫塑料切片架上，加適量修復(fù)液 1× 檸檬酸鈉抗原修復(fù)液（試劑 2，將 100×檸檬酸鈉抗原修復(fù)液加去離子水稀釋成 1×檸檬酸鈉抗原修復(fù)液），液面要浸過切片組織一定高度，將修復(fù)盒置于沸水中煮沸修復(fù) 15 分鐘后取出玻片，自然涼至室溫。用 PBS 緩沖液沖洗切片 5 分鐘，重復(fù)三次。

注意：抗原修復(fù)時，修復(fù)液務(wù)必保證切片始終浸泡在液體內(nèi)，一般情況：修復(fù)液的量約為 800mL/1 架。3.阻斷內(nèi)源性過氧化物酶。用吸水紙擦干玻片，免疫組化筆在組織周圍畫圈，滴加 50μL 內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑（試劑 3）到切片組織上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育 30 分鐘，用 PBS 緩沖液沖洗切片 5 分鐘，重復(fù)三次。

4. 血清封閉。用吸水紙擦干玻片，滴加 50μL 正常山羊血清工作液（試劑 5），37℃封閉 20 分鐘，以減少非

特異性染色。

5. 一抗孵育。用抗體稀釋液（試劑 4）將一抗原液稀釋成工作液，用吸水紙擦干玻片組織周圍的液體，滴加適量抗體工作液，置于濕盒 4℃孵育過夜或 37℃孵育 1h-2h。

6. 復(fù)溫。4℃過夜后從冰箱拿出樣本，在室溫下孵育 15min 復(fù)溫（抗體孵育為 4℃過夜選用此步驟，如室溫孵育直接進(jìn)入下一步清洗）。用 PBS 緩沖液沖洗切片 5 分鐘，重復(fù)三次。

7. 二抗孵育。吸水紙擦干切片后滴加 50μL 生物素標(biāo)記的羊抗兔 IgG（試劑 6），37℃孵育 20  分鐘，用 PBS

緩沖液沖洗切片 5 分鐘，重復(fù)三次。

8. 三抗孵育。吸水紙擦干切片后滴加 50μL 辣根酶標(biāo)記的鏈酶卵白素孵育（試劑 7），37℃孵育 20  分鐘，用 PBS 緩沖液沖洗切片 5 分鐘，重復(fù)三次。

9. 顯色。甩去 PBS 緩沖液，吸水紙擦干切片； 每張切片滴加新鮮配制的 DAB 工作液 50μL（試劑 8：試劑 9：試劑 1=1:1:18  比例配置），孵育 3-5min，光學(xué)顯微鏡下觀察染色結(jié)果，切勿顯色過深；顯色后用自來水沖洗切片終止顯色。

10. 復(fù)染。滴加適量蘇木素染液（試劑 10）復(fù)染，孵育 1-5 分鐘，自來水沖洗 5 分鐘，滴加鹽酸酒精分化

液分化 30 秒，自來水沖洗。

11. 脫水封片。將玻片依次置于 70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、95%乙醇、無水乙醇，各浸泡 5 分鐘， 再將玻片放入二甲苯中浸泡 15 分鐘，重復(fù)三次。玻片取出來稍晾干，用中性樹膠封片。

結(jié)果判斷

在光學(xué)顯微鏡下對染色的切片觀察并判斷。蘇木素染細(xì)胞核為藍(lán)色，DAB 顯色的陽性表達(dá)為棕黃色。

注意事項

1. 檢測樣本時需同時做陰性對照和陽性對照，否則結(jié)果不可取。

2. 本品中的配套試劑，請不要用其他生產(chǎn)商產(chǎn)品替換使用。

3. DAB 為致癌物質(zhì)，請采取必要的防范措施，現(xiàn)用現(xiàn)配。

4. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療。

5. 此試劑是否可用于除中性福爾馬林或多聚甲醛之外固定的組織未得到驗證。