細(xì)胞名稱(chēng)：U251人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞ATCC

細(xì)胞代次：P4

細(xì)胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運(yùn)輸費(fèi)）

細(xì)胞凍存：無(wú)血清凍存液

細(xì)胞傳代：第一次建議1:2

細(xì)胞收到后處理

培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿(mǎn)培養(yǎng)液并封好瓶口是運(yùn)輸細(xì)胞的最好辦法。收到細(xì)胞用75%酒精噴灑整個(gè)細(xì)胞瓶，消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi)嚴(yán)格無(wú)菌操作，將細(xì)胞瓶放入37℃、5%CO₂的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時(shí)以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)后再做處理。顯微鏡觀(guān)察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（最好40x,100x,200x各一張），前三天照片是重要售后依據(jù)，不提供照片默認(rèn)收到狀態(tài)良好。（注意密封培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱時(shí)要將蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶的培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的培養(yǎng)基，以便進(jìn)行對(duì)比培養(yǎng)）

培養(yǎng)步驟

細(xì)胞傳代：如果未超過(guò)80%匯合度時(shí)，將瓶裝的培養(yǎng)液收集至離心管中，留5ml培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO₂孵箱培養(yǎng)；如果細(xì)胞密度超80%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)，傳代具體步驟如下細(xì)胞傳代：

A1、對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。

A2、懸浮細(xì)胞凍存：

1、細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，將T25 培養(yǎng)瓶中的懸液收集至離心管中1000rpm

離心5min；

2、棄上清，沉淀細(xì)胞加入1ml/支的雅吉生物無(wú)血清凍存液（C7001），混勻后加入凍存管中。（如：凍一支，加入 1ml 無(wú)血清凍存液即可）

3、將凍存細(xì)胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要將細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮罐中，需在-80℃冰箱存

放 24 小時(shí)以上。

B1、對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考如下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2. 添加0.25%消化液約1-2ml至培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細(xì)胞，使之脫落后吸出，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基重懸。

4. 將細(xì)胞懸液按1：2的比例進(jìn)行分瓶傳代（兩個(gè)T25瓶），補(bǔ)充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO₂的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

B2、貼壁細(xì)胞凍存：

1、細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀(guān)察，待細(xì)胞回縮變圓后加入5ml培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心 5min；

3、 棄上清，沉淀細(xì)胞加入1ml的雅吉生物無(wú)血清凍存液（貨號(hào)：C7001），混勻后加入凍存管中。

細(xì)胞復(fù)蘇：

1、從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意佩戴防護(hù)面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍， 直至凍存管中無(wú)結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2、將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3、棄上清，沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸，接種至T25培養(yǎng)瓶，放于37℃,5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4、第二天，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：有些細(xì)胞比較特殊，如貼壁不牢，在運(yùn)輸過(guò)程中發(fā)生容易細(xì)胞脫落，這是正常現(xiàn)象。請(qǐng)將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm離心5min，收集上清作過(guò)渡培養(yǎng)（后期對(duì)比培養(yǎng)），沉淀加入消化液1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml培養(yǎng)基終止反應(yīng)。再離心，棄上清，加1-2ml培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代（兩個(gè)T25），補(bǔ)充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

YS291CTE-10人食管癌細(xì)胞

YS292CTE-11人食管癌細(xì)胞

YS293CTE-13人食管癌細(xì)胞

YS294CTG-905瘤細(xì)胞人腦膠質(zhì)母細(xì)胞

YS295CTHP-1白血病細(xì)胞人單核細(xì)胞

YS296C非雄激素依賴(lài)型前列腺癌Tsu-prl

YS297CTT人髓狀甲狀腺腫瘤細(xì)胞

YS298C瘤U-118MG人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞

YS299C宮頸癌U14（懸浮）

YS300CU-2OS人骨肉瘤細(xì)胞

YS301CU251人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞

YS302C骨髓瘤U266

YS303CU87MG瘤細(xì)胞人惡性膠質(zhì)母細(xì)胞

YS304CU937人白血病細(xì)胞

YS305C癌UM-UC-3人膀胱移行細(xì)胞

YS306CV79中國(guó)倉(cāng)鼠肺細(xì)胞

YS307CVCAP(ATCC)人前列腺癌細(xì)胞

YS308CVE人血管內(nèi)皮細(xì)胞

YS309CVero綠猴腎細(xì)胞

YS310C肉瘤W256瘤

YS311CWI-38人胚肺成纖維細(xì)胞

YS312CWISH人羊膜細(xì)胞

YS313CYac-1小鼠淋巴瘤細(xì)胞

YS314C（ATCC）ZR75-1人乳腺癌細(xì)胞

YS315CMHCC97L人地轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞

YS316CINS-1大鼠胰島細(xì)胞

YS317CCCD-18C0人結(jié)腸組織細(xì)胞

YS318CLX2人肝星狀細(xì)胞

YS319CPC-9人肺癌細(xì)胞

YS320CPATU-8988人胰腺癌細(xì)胞

YS321CKYSE30人食管鱗狀癌細(xì)胞

YS322C2.2.15hepg2.2.15人肝癌細(xì)胞

YS323CNCI-H1688肺癌細(xì)胞人經(jīng)典小細(xì)胞

YS324C株NCI-H3255人肺癌細(xì)胞

YS325CBV-173人外周血B細(xì)胞

YS326CHCV-29人膀胱上皮細(xì)胞

YS327CHKC人腎小管上皮細(xì)胞

YS328CHTR8人滋養(yǎng)細(xì)胞

YS329CIM-9人外周血B淋巴細(xì)胞

YS330C瘤J774A.1小鼠腹水單核細(xì)胞

YS331CLP-1人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞

YS332CMAVER-1人淋巴瘤細(xì)胞

YS333CMIAPaCa-2人胰腺癌腫瘤細(xì)胞

YS334CNCI-H226人肺鱗癌細(xì)胞

YS335CSCC4人口腔鱗癌細(xì)胞

YS336CSCC9人舌鱗癌細(xì)胞

YS337CSKO-007人骨髓瘤細(xì)胞

YS338CTM4正常小鼠睪丸細(xì)胞

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